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                                                            不同血清学检测法诊断儿童梅毒的应用研究

                                                            添加时间:2017/01/13 来源:未知 作者:admin
                                                            目前梅毒检测方法主要分为病原体检测、血清学筛选试验及血清学确证试验。临床实验室多采用血清学试验,但单独的试验往往存在一定的局限性。为寻找更为合理的检测儿童梅毒的手段,本研究应用三种检测方法进行比较,以获得较为可行的联合检测手段。
                                                            以下为本篇论文正文:
                                                              [摘要]目的 探讨三种血清学检测方法在临床诊断儿童梅毒中的应用情况。方法 选择沈阳市儿童医院2014年12月至2016年2月门诊及住院患者4230例,分别进行了以下检测:甲苯胺红不加热血清试验(TRUST)、梅毒螺旋体抗体检测胶体金法(SYP)、梅毒螺旋体明胶凝集试验(TPPA),并对检测结果进行分析。结果 用三种方法对血液标本进行检测,经任意一项检测为阳性即视为阳性患者共28例。其中三项检测均为阳性4例(14.3%),有两项检测为阳性11例(39.3%),只有一项检测为阳性13例(46.4%)。确诊阳性患者15例。在检测中TRUST特异度(92.3%)高,但敏感度(40.0%)低;SYP敏感度(86.7%)高,但特异度(7.7%)低,均不适宜单独作为初筛检测试验。应用TRUST和SYP联合检测作为初筛试验,其中任意一种为阳性结果,灵敏度为100.0%.结论 用TRUST、SYP联合作为梅毒初筛检测试验;TPPA可以用作梅毒确诊实验;TRUST适宜疗效观察。
                                                              
                                                              [关键词]儿童梅毒;甲苯胺红不加热血清试验;梅毒螺旋体抗体检测胶体金法;梅毒螺旋体明胶凝集试验
                                                              
                                                              近年来,由于梅毒感染率逐渐增加[1-2],儿童梅毒的发病率也随之上升。梅毒是由苍白螺旋体(treponema pallidum,TP)引起的慢性、系统性性传播疾病,临床表现较为复杂[3].儿童梅毒大多为宫内感染所致[4],获得性梅毒较为少见[5],但由于父母常常隐瞒病情,易延误治疗,从而给儿童身心健康及发育造成了严重影响。目前梅毒检测方法主要分为病原体检测、血清学筛选试验及血清学确证试验。临床实验室多采用血清学试验,但单独的试验往往存在一定的局限性。为寻找更为合理的检测儿童梅毒的手段,本研究应用三种检测方法进行比较,以获得较为可行的联合检测手段。
                                                              
                                                              1资料与方法
                                                              
                                                              1.1一般资料
                                                              
                                                              选取2014年12月至2016年2月在沈阳市儿童医院就诊的0~8岁患儿4230例。经病史、临床诊断及血清学检验均为阳性确诊梅毒感染患儿15例,梅毒的血清学试验诊断至少1种方法阳性的患儿共28例。
                                                              
                                                              1.2方法
                                                              
                                                              对4230例患儿分别进行了甲苯胺红不加热血清试验(TRUST)、梅毒螺旋体抗体检测胶体金法(SYP)、梅毒螺旋体明胶凝集试验(TPPA)。所有血液标本的采集、运输、保存严格按照说明书要求,并由专门人员进行检测和阴阳结果判断。
                                                              
                                                              1.3试剂
                                                              
                                                              TRUST、SYP和TPPA试剂分别采自上海荣盛生物药业有限公司、英科新创(厦门)科技有限公司和日本富士瑞必欧株式会社。
                                                              
                                                              1.4统计学方法
                                                              
                                                              本研究采用描述性统计方法,通过对实验结果的综合分析找寻一个合理的检测程序。
                                                              
                                                              2结果
                                                              
                                                              2.1不同血清学检测方法的比较
                                                              
                                                              结合临床资料及血清学检测结果,确诊病例为15例。在检测中TRUST特异度较高,但灵敏度较低;SYP灵敏度较高,但特异度较低;而TPPA的特异度和灵敏度均为100.0%.TRUST、SYP、TPPA三种血清学检测结果见表1.
                                                              
                                                              三种血清学检测方法的比较结果
                                                              
                                                              2.2甲苯胺红不加热血清试验和梅毒螺旋体抗体检测胶体金法联合检测的比较
                                                              
                                                              应用TRUST和SYP联合检测作为初筛试验,其中任意一种为阳性结果,灵敏度为100.0%,无漏诊,见表2.
                                                              
                                                              两种血清学检测方法联合应用比较结果
                                                              
                                                              2.3甲苯胺红不加热血清试验滴度与其他试验比较
                                                              
                                                              TRUST滴度检测可作为梅毒患者疗效观察以及复发或再感染的指标。本研究中有7例TRUST阳性患者,当滴度≥1:64时,其他两项试验均为阳性,见表3.
                                                              
                                                              TRUST滴度与其他试验比较结果
                                                              
                                                              3讨论
                                                              
                                                              3.1儿童梅毒的研究现状
                                                              
                                                              梅毒主要是通过性接触和血液传播,发病率在中国呈不断上升的趋势[6].梅毒螺旋体易通过胎盘感染胎儿,导致先天性梅毒(congenital syphilis,CS),可于新生儿期、婴儿期和儿童期发病。目前认为妊娠任何时期均可发生CS[7].随着孕妇梅毒发病率的升高,CS发病率也明显上升。儿童梅毒主要是由于在宫内感染所致,少数可通过哺乳、输血等接触而传染。小儿梅毒主要从流行病学资料、临床表现、实验室检查等几方面进行诊断。超过50%的早期CS患儿在出生时表现正常,2/3在出生3~8周内出现症状[7],导致新生儿期时CS缺乏典型的临床表现。诊断梅毒要有丰富的临床经验,实验室检测是临床诊断的主要依据,也是监测和防止医院感染的重要手段[4].孕期梅毒筛查及治疗可有效地预防CS[8].
                                                              
                                                              3.2梅毒检测方法的综合分析
                                                              
                                                              人体感染梅毒螺旋体后,体内产生两种抗体:特异性抗梅毒螺旋体抗体和非特异性抗心磷脂(Cardiolipin)抗体。非特异性抗心磷脂抗体又称反应素,是由梅毒螺旋体破坏的组织细胞所释放的类脂样物质以及梅毒螺旋体自身的类脂和脂蛋白刺激机体产生的IgM和IgG体,临床常使用TRUST方法检测。TRUST法检测的是一种非特异性抗体,约感染6周后可检出,因此在梅毒感染初期及潜伏期患者,极易因漏诊出现假阴性结果,但其滴度变化与梅毒治疗情况呈正相关,因此适合用于梅毒治疗的疗效观察、随访和复发的辅助诊断,对病情的评估有着重要的作用[9].该法操作较为简便,结果容易判读,其半定量试验可作为疗效观察的指标。以往通常单独作为梅毒初筛的指标。但本研究显示该法灵敏度较低,容易出现假阴性而漏诊,不适于单独筛查使用。其原因为TRUST法所用抗原多可与其他非特异性抗体有交叉反应,如风疹、类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮以及健康老年人均可造成假阳性结果。本研究中该种方法的假阳性率较低(7.7%),与其他对成人的研究不符[10],可能是因为儿童血清中干扰因素较少所致。
                                                              
                                                              SYP是新近发展起来的快速体外诊断技术,利用现代生物工程技术纯化重组基因的梅毒抗原,以胶体金作为指示标记。该法操作简捷、用血量少、灵敏、结果容易观察和保存。但本研究显示,SYP的灵敏度(86.7%)和假阳性率(92.3%)均较高,可作为筛检方法,但需要确证试验来排除假阳性。该方法仍存在一定的假阴性率(13.3%),如果单用该方法进行筛查,会存在漏诊的风险,因此也不适宜用于单独筛查。由于试验方法的局限性,虽然有较高的假阳性率,但也存在一定的假阴性率。这也正需要联合试验补充修正。
                                                              
                                                              TPPA采用双抗体夹心法,具有特异强、灵敏高、重复性好的优点,较多用在潜伏期及难以诊断梅毒的检测,是目前国内推荐的梅毒确证试验方法。但是,该方法需要运用手工操作和主观判断,并且具有极为繁琐的步骤和较高的操作水平要求及较昂贵的价格,因此在检测大样本的过程中极为不利,其仅适用在确证TRUST、酶联免疫吸附试验(ELISA)、快速血浆反应素试验(RPR)等检测后的阳性标本中。除此之外,该方法的检测原理类似于ELISA,能够对lgG型和lgM型抗体进行同时检测,因此也不适用在观察患者的疗效和对患者复发及再感染情况进行判断。
                                                              
                                                              3.3检测方法的联合应用情况
                                                              
                                                              以往的经验通常是先采用TRUST或SYP筛查梅毒血液标本,如果得到阳性结果再进行确诊试验。本研究显示,不管采用哪种方法单独筛查,都会存在较大的漏诊风险;然而采用两种或两种以上方法联合筛查,会使这种风险大大降低。但也不是越多方法联合检测越好,还应从患者的经济承受能力以及临床具体工作等方面进行综合分析,采用一套性价比最高的检测方案。
                                                              
                                                              总之,基于三种血清试验的优缺点,建议采取如下程序对疑似儿童梅毒患儿进行血清学检测:首先用TRUST、SYP进行初筛,如果其中有一项阳性再用TPPA进行确认,这样就可以实现在降低检测成本的同时又降低了漏诊、误诊的发生率;同时用TRUST法观察患者的临床疗效及对其复发和再感染情况进行判断。
                                                              
                                                              [参考文献]
                                                              
                                                              [1]Cabié A,Rollin B,Pierre-Franois S,et al. Reemergence of syphilisin M artinique,2001 - 2008[J]. Emerg Infect Dis,2010,16(1) :106-109.
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